Klinika makabi warszawa

Antymitogenne działanie HDL i APOE za pośrednictwem aktywacji IP zależnej od Cox-2 czesc 4

5 września 2019 by admin

Wpływ HDL był zależny od dawki, przy IC50 około 20 .g / ml. Oczyszczone rekombinowane APOE również zahamowały wejście fazy S w sposób zależny od dawki, podczas gdy oczyszczona rekombinowana APOA-I nie miała żadnego działania (Figura 1c). Wytworzyliśmy N-końcowe 22-kDa i 10-kDa C-końcowe domeny APOE jako rekombinowane białka i odkryliśmy, że antymitogenna aktywność APOE była w dużej mierze zawarta w N-końcowej domenie wiążącej receptor (patrz Figura 1c, porównaj APOE10 z APOE22. ). Figura 1HDL i APOE hamują wejście fazy S w aorty w SMC. (a) Spoczynkowe tryskanie aorty SMC poddawano trypsynizacji i replikowano 10% FBS w wybranych czasach w nieobecności (kontrola) lub obecności 50 .g / ml HDL zubożonego w LDL, HDL lub HDL. (b) Komórki spoczynkowe stymulowano 10% FBS przez 48 godzin w obecności rosnących stężeń HDL z niedoborem LDL, HDL lub APOE. (c) Spoczynkowe tryskanie aorty SMC poddano trypsynizacji, dodano do szalek 35 mm zawierających szkiełka nakrywkowe i stymulowano 10% FBS przez 48 godzin w obecności wzrastających stężeń APOA-I, APOE, APOE22 lub APOE10. Wbudowanie BrdU w jądra oznaczono za pomocą mikroskopii immunofluorescencyjnej. Wyniki pokazują średnią. SEM, n = 3, * P <0,01 w porównaniu z komórkami traktowanymi samym 10% FBS. APOE hamuje ekspresję genu cykliny A poprzez niezależne i niezależne szlaki białka kieszeni. Ponieważ indukcja cykliny A reguluje wejście komórek w fazę S, wpływ APOE na ekspresję cykliny A i aktywność promotora badano we wczesnych pasażach aorty SMC. Porównaliśmy działanie APOE i APOA-I na aorty SMC przejściowo transfekowane wektorem ekspresyjnym reportera lucyferazy cykliny A. Wstępne badania wykazały, że promotor cykliny A był optymalnie indukowany około 18 godzin po stymulacji surowicy SMC w stanie spoczynku (dane nie przedstawione). APOA-1 (2 .m) minimalnie (<10%) wpływał na aktywację promotora cykliny A, podczas gdy APOE wykazywały zależne od dawki hamowanie, które osiągnęło więcej niż 70% (Figura 2a). Cyklina A była wyrażana w 85% jąder po tym, że SMC z aorty stymulowano surowicą lub surowicą za pomocą APOA-I (Figura 2b). Cyklina A była jednak eksprymowana tylko w 35% jąder w komórkach traktowanych surowicą i APOE (Figura 2b). Analiza przebiegu czasowego wykazała, że ekspresja cykliny A była indukowana w aortalnych SMC przez 24 godziny stymulacji surowicy i że indukcja była hamowana przez APOE (Figura 2c). Cyklina D1 i cyklina E nie ulegały wpływowi APOE (rysunek 2c). Ponadto, ektopowa ekspresja cykliny A w mysich SMC uratowała wejście fazy S w obecności APOE (Figura 2d). APOE hamował również wejście fazy S (nie pokazane), ekspresję cykliny A i aktywność kinazy związanej z cykliną Ap w linii SMC szczura A10 (Figura 2e). Figura 2 Hamowanie ekspresji genu cykliny A przez APOE. (a) Aktywność promotora cykliny A w wczesnych pasażach aortalnych SMC określono sposobem opisanym w metodach. Wyniki pokazują średnią. SEM, n = 3, * P <0,001 w porównaniu z komórkami stymulowanymi 10% FBS. C, kontrola. (b) Spoczynkowe SMC inkubowano przez 48 godzin z 10% FBS w nieobecności lub obecności 2. M APOA-I lub APOE przed analizą ekspresji cykliny A za pomocą mikroskopii immunofluorescencyjnej. Barwienie DAPI pokazuje jądra komórkowe. (c) Spoczynkowe mysie aorty SMC potraktowane 10% FBS w nieobecności lub obecności 2. M APOE zebrano, poddano lizie i analizowano przez immunoblotting stosując Ab. s do cykliny D1, cykliny E, cykliny A i cdk4 (kontrola obciążenia ). (d) Aortyczne SMC przejściowo kotransfekowano wektorem ekspresyjnym eGFP i albo wektorem ekspresyjnym kontrolnym (wektor) albo cykliną A. Wpływ ekspresji cykliny A na wejście fazy S określono w nieobecności lub obecności 2. M APOE lub 2. M APOA-I, jak opisano w Methods. Wyniki pokazują średnią. SEM, n = 2, * P <0,001 w porównaniu z komórkami stymulowanymi 10% FBS (wektor). (e) A10 SMC traktowano jak w c, zebrano po 20 godzinach, poddano lizie i analizowano przez immunoblotting dla cykliny A i aktyny (kontrola obciążenia). Lizaty komórkowe inkubowano z anty-cykliną A, a immunoprecypitaty zastosowano do oceny aktywności kinazy in vitro lub analizowano przez immunoblotting dla związanego cdk2. Przeprowadziliśmy kotransfekcję mysich aortalnych SMC z konstruktem reportera cykliny A-lucyferazą i wektorem ekspresyjnym E7 wirusa brodawczaka ludzkiego 18, aby zbadać wpływ APOE na aktywność promotora cykliny A zależnego od białka kieszeniowego. E7 sekwestruje białka kieszeni (26) i naśladuje fosforylację za pośrednictwem cdk, powodując transkrypcję genów, takich jak cyklina A. Transfekowane komórki były głodzone w surowicy, a następnie stymulowane surowicą przez 18 godzin w obecności APOA-I, APOE lub izolowanego Domeny APOE22 (N-terminal) i APOE10 (C-końcowe) [podobne: football trening, tomografia komputerowa cennik, szczepienie dur brzuszny ] [przypisy: witaminy dla nastolatków, makabi, makabi warszawa ]

Posted in: Bez kategorii Tagged: makabi, makabi warszawa, witaminy dla nastolatków

Partnerzy serwisu:



Zobacz tez:

Skierowanie na zależne od TACE uwalnianie ligandu EGFR w raku piersi czesc 4

Analiza ELISA kondycjonowanej pożywki z doświadczenia pokazanego w C. AREG i TGF-a. są kluczowymi substratami TACE w komórkach T4-2. Oprócz uwalniania czynników wzrostu, TACE jest zaangażowany w zrzucanie kilku innych cząsteczek na powierzchni komórki, których hamowanie może również przyczyniać się do obserwowanej rewersji fenotypu komórki T4-2. Charakterystyczne substraty TACE obejmują TNF-a (18, 19), selektyny L ... [Read more...]

Antymitogenne działanie HDL i APOE za pośrednictwem aktywacji IP zależnej od Cox-2 czesc 4

Wpływ HDL był zależny od dawki, przy IC50 około 20 .g / ml. Oczyszczone rekombinowane APOE również zahamowały wejście fazy S w sposób zależny od dawki, podczas gdy oczyszczona rekombinowana APOA-I nie miała żadnego działania (Figura 1c). Wytworzyliśmy N-końcowe 22-kDa i 10-kDa C-końcowe domeny APOE jako rekombinowane białka i odkryliśmy, że antymitogenna aktywność APOE była ... [Read more...]

Oś jelita / mózg i mikroflora ad 7

Jednak wpływ katecholamin na niepatogenne organizmy i inne cząsteczki sygnałowe drobnoustrojów na skład mikroflory jelitowej i aktywność metaboliczną u zdrowych osób i w chorobie nie jest znany. Sygnalizacja mikrob-host za pośrednictwem mikrobiologicznych cząsteczek sygnałowych. Zidentyfikowano szereg cząsteczek sygnałowych, dzięki którym mikroflora jelita może komunikować się z układami gospodarza, takimi jak ENS (17) i mózg (Figura ... [Read more...]

DevURL

Polecane:

psychoterapia katowice

Tags

bakteryjne zapalenie pochwy leki choroba dwubiegunowa przyczyny dieta paleo jadłospis na tydzień etnoliga football trening ile kcal ma bułka grahamka karpacz informacja turystyczna leclerc szczecin godziny otwarcia luxmed lublin odbiór wyników makabi makabi warszawa najlepszy prezent dla kobiety nietrzymanie moczu zabieg proces pielęgnowania pacjenta z nadciśnieniem tętniczym program promocji zdrowia rezonans magnetyczny otwarty warszawa rezonans magnetyczny przeciwwskazania stargard szczeciński szpital szczepienie dur brzuszny szpital lublin jaczewskiego tomografia komputerowa cennik witaminy dla nastolatków

Copyright © 2019 Klinika makabi warszawa.