To rekombinowane białko było również słabo rozpuszczalne w PBS. Hamowanie p38 zapobiega indukowanej przez toksynę A (3 naciekowi neutrofili i zapaleniu jelit u myszy. Aktywacja kinazy p38 MAP toksyny wywołanej przez toksynę C. difficile jest wymagana do wytwarzania IL-8, martwicy i IL-1 (3. uwalnianie przez monocyty in vitro.
Następnie do pożywki dodano toksynę C. difficile A (40 nM) lub a-toksynę S. aureus, toksynę tworzącą pory (10 nM), i monocyty inkubowano przez dodatkowe 90. 120 minut aż do ponad 90 % monocytów było nekrotycznych w grupie kontrolnej. (a) Jak zaobserwowano w mikroskopii z kontrastem fazowym (x 320), obie toksyny wywoływały cechy morfologiczne charakteryzujące nekrozę, … [Read more…]
Komórki THP-1 stymulowano toksyną A (100 nM) przez różne okresy czasu. Aktywności ERK 1/2 (a), p38 (b) i JNK1 (c) zmierzono metodą immunoblottingu z użyciem przeciwciał fosfospecyficznych (górne panele). Aktywności enzymatyczne ERK2, p38 i JNK1 mierzono testami kinazy in vitro po immunoprecypitacji (dolne panele). Mielinowe białko podstawowe (MBP) zastosowano jako substrat dla ERK2 i p38, … [Read more…]
Wszystkie doświadczenia z transfekcją przeprowadzono trzykrotnie. Plazmidy kodujące dominujące negatywne mutanty MKK3 i MKK6 zostały dostarczone przez Rogera Davisa (University of Massachusetts Medical School, Worcester, Massachusetts, USA). C3 katalizowany egzoenzymem test ADP-rybozylacji Po ekspozycji na toksynę A, odwirowano 5 x 106 komórek THP-1 lub hodowanych monocytów izolowanych z 10 ml krwi i zawieszono w 50 … [Read more…]
W wyniku wnikliwej inspekcji zmniejszone wychwytywanie barwnika obserwowano w Sgcg, Tg50 w porównaniu z mięśniami pozbawionymi Sgcg, co zaobserwowano w przeponie i mięśniach brzucha (ryc. 5, A i B). Mikroskopowo, wychwyt barwnika był zmniejszony w mięśniach czworogłowych (Figura 5C). Procent mięśnia przepony zmętnowany przez wychwyt barwnika był zmniejszony w Sgcg, Tg50 w porównaniu z mięsakiem … [Read more…]
Generowano myszy transgeniczne eksprymujące mysią Mini-Gamma pod kontrolą promotora ludzkiego desminy (DES). Dwie niezależne linie Mini-Gamma zostały scharakteryzowane; Tg50 miał wyższą ekspresję, podczas gdy Tg84 miał ekspresję niższego poziomu. (B) Aby ocenić tworzenie kompleksu sarkoglikanu, preparaty mikrosomalne oczyszczono z transgenicznego mysiego mięśnia. Wyizolowano mikrosomy związane z błoną. Wiadomo, że kompleks sarkoglikanu wzbogaca ciężką frakcję mikrosomalną … [Read more…]
Poprzednio wykazano, że P- i P-sarkoglikan tworzą podjednostkę rdzeniową, a następnie dodano do kompleksu .-cyganoglikan. Ekspresja poszczególnych podjednostek sarkoglikanu. . -,. – lub.
Aby przetestować funkcjonalność Mini-Gamma, wykorzystano system GAL4 / UAS do ekspresji mysiego Mini-Gamma w uprzednio ustalonym modelu dystrofii mięśniowej Drosophila (17, 18). Drosophila ma pojedynczy (3 / a-sarkoglikanowy ortolog, który jest równie powiązany z s-ai-sarkoglikanem (35% identyczny, 56% podobny do każdego). Muchy Sgcd840 mają dużą delecję genu Sgcd Drosophila, a muchy Sgcd840 rozwijają upośledzoną ruchliwość … [Read more…]
Pominięcie eksonu wykorzystuje antysensowne oligonukleotydy jako leczenie chorób genetycznych. Antysensowne oligonukleotydy stosowane do pomijania egzonu są zaprojektowane do ominięcia przedwczesnych kodonów stop w docelowym RNA i przywrócenia przerwania ramki odczytu. Pomijanie egzonu jest obecnie testowane na ludziach z mutacjami genu dystrofiny, którzy mają dystrofię mięśni Duchenne a. W przypadku dystrofii mięśniowej Duchenne a uzasadnienie pominięcia … [Read more…]
Membranę PVDF zawierającą. 2 FLC następnie pocięto na paski, które odciągnięto, przemyto i zablokowano, a następnie sondowano 0,2. Mol / l biotynylowanego ludzkiego THP, który został wstępnie inkubowany z. 100 × 30 × 10 × 3 lub x molowe ilości (względem THP) cyklicznego peptydu konkurenta (AHX-CLSADSSGSYLYVCKK) lub peptydu kontrolnego (AHX-CLSAHSSGSYLYVCKK) przez noc w 4 ° … [Read more…]