Warning: Declaration of WPRandomPostsWidget::update($new_instance) should be compatible with WP_Widget::update($new_instance, $old_instance) in /home/hydra17/ftp/makabiwarszawa.pl/wp-content/plugins/wp-random-posts/randomposts.php on line 38
CX3CR1 reguluje homeostazę makrofagów jelitowych, translokację bakteryjną i odpowiedzi kolektywne Th17 u myszy ad 8 – Klinika makabi warszawa

Klinika makabi warszawa

CX3CR1 reguluje homeostazę makrofagów jelitowych, translokację bakteryjną i odpowiedzi kolektywne Th17 u myszy ad 8

16 września 2019 by admin

Martwe komórki zidentyfikowano przy użyciu utrwalanego zestawu Aqua Dead Cell Staining Kit (Invitrogen). Rekombinowany mysi M-CSF pochodził od Peprotech. Siarczan dekstranu sodu (masa cząsteczkowa, 40. 50 kDa) pochodził z firmy USB Corp. Isolation of LP cells. Izolację komórek LP przeprowadzono jak opisano wcześniej z modyfikacjami (15). W skrócie, jelita cienkie zostały usunięte i starannie oczyszczone ze swojej krezki, a łatki Peyera zostały wycięte. Jelito cienkie i grube otworzyło się podłużnie, przemyto zawartość kału, pocięto na kawałki o długości 0,5 cm i poddano dwu kolejnej 20-minutowej inkubacji w HBSS z 5% FCS i 2 mM EDTA w 37 ° C z mieszaniem w celu usunięcia komórek nabłonka. . Po każdym etapie inkubacji odrzucano pożywki zawierające komórki nabłonka i szczątki. Pozostałą tkankę mielono i inkubowano przez 20 minut w HBSS z 5% FCS, mg / ml kolagenazy IV (Sigma-Aldrich) i 40 U / ml DNazy I (Roche) w 37 ° C w trakcie mieszania. Zawiesiny komórkowe zebrano i przepuszczono przez filtr o średnicy 100 .m i osadzono przez odwirowanie przy 300 g. Cytometrii przepływowej. Izolowane komórki LP ponownie zawieszono w PBS zawierającym 5% FBS. Żywe komórki zidentyfikowano przy użyciu zestawu do zabarwienia komórek Martwych Celi Aqua zgodnie z instrukcjami producenta, a receptory Fc zablokowano przeciwciałem anty-FcyRIII / II (2,4G2) przez 15 minut w temperaturze 4 ° C. Po inkubacji komórki barwiono w temperaturze 4 ° C przez 30 minut znakowanymi przeciwciałami. Próbki następnie przemyto 2 razy w PBS zawierającym 5% FBS i natychmiast zanalizowano, lub barwienie wewnątrzkomórkowe przeprowadzono stosując zestaw do wiązania / permeabilizacji FoxP3 (eBioscience) lub zestaw Cytofix / Cytoperm z GolgiPlug (BD). Analizę cytometrii przepływowej przeprowadzono na LSR II (BD). Real-time PCR. Całkowity RNA wyizolowano z oczyszczonych makrofagów LP i DC przy użyciu zestawu QIAGEN RNeasy Mini Kit, zgodnie z protokołem producenta, z trawieniem DNazy na kolumnie przy użyciu zestawu DNazy wolnego od RNazy. cDNA wytworzono stosując system Superscript do syntezy pierwszej nici do RT-PCR i losowe startery heksamerowe (Invitrogen), zgodnie z protokołem producenta. cDNA zastosowano jako matrycę do qRT-PCR z użyciem SYBR Green Master Mix (Bio-Rad) i starterów dla Cx3cr1 (F, AGGACACAGCCAGACAAG; R, TCAGGGGAGAAGCAAG) i Gapdh (F, TGGCAAAGTGGAGATTGTTGCC; R, AAGATGGTGATGGGCTTCCCG). PCR i analizę przeprowadzono przy użyciu MyiQ iCycler (Bio-Rad), a ekspresję genu obliczono względem Gapdh. Indukowane przez DSS zapalenie jelita grubego. Myszom dostarczono 3% (wag./obj.) DSS rozpuszczonego w wodzie pitnej przez 5 dni. Codzienna ocena kliniczna zwierząt leczonych DSS obejmowała pomiar zweryfikowanego klinicznego DAI w zakresie od 0 do 4 (41), który obliczono przy użyciu następujących parametrów: konsystencja stolca, obecność lub brak krwi w kale (Hemoccult, Beckman Coulter) i waga utrata. Myszy zabito w dniu 5, a okrężnice oceniano pod kątem histologii. Blokowanie efektu cytokiny in vivo. U myszy z niedoborem CX3CR1 (Cx3cr1gfp / gfp lub Cx3crlp / a) lub Cx3cr1 + / + zastosowano DSS, jak opisano powyżej. Myszom wstrzyknięto 200. G neutralizujących przeciwciał kontrolnych IL-17A lub izotypowych w dniach 0, 2 i 4. Zapalenie okrężnicy oceniano jak opisano powyżej. Przybieranie szpiku kostnego. Całkowite komórki szpiku kostnego myszy Cx3cr1gfp / gfp lub Cx3cr1 + / + hodowano w obecności 10 ng / ml M-CSF. Pożywkę wymieniano co 2 dni, a w dniu 7 zbierano adherentne makrofagi. BMDM (1 x 106) przeniesiono adoptywnie (wstrzyknięcie do żyły ogonowej) myszom Cx3cr1 + / + lub Cx3cr1gfp / gfp w dniach 1-1 i +1 leczenia DSS. Zapalenie okrężnicy oceniano w sposób opisany powyżej. Kultura bakteryjna. Całkowitą zawiesinę komórek mLN hodowano w warunkach tlenowych na płytkach z agarem LB z krwią przez 24 godziny w 37 ° C. Całkowity DNA wyizolowano bezpośrednio z poszczególnych kolonii i zsekwencjonowano pod kątem genu 16S rDNA, stosując następujące startery: F, AGAGTTTGATCACTGGCTCAG; R, CTGCTGCCTCCCGTAGGAGT. Wyrównanie homologii przeprowadzono przy użyciu oprogramowania NCBI BLAST. Statystyka. Analizę statystyczną przeprowadzono za pomocą oprogramowania Prism (GraphPad Software), stosując niesparowany dwustronny test Studenta. Słupki błędów przedstawiają SD lub SEM, jak wskazano. Wartości P mniejsze niż 0,05 uznano za statystycznie istotne. Materiały uzupełniające Zobacz dodatkowe dane Podziękowania Podziękowania dla Aaron Rae (Departament Pediatrii i Opieki Zdrowotnej Atlanta Flow Core firmy Emory University) za sortowanie komórek. Praca ta była wspierana przez granty NIH (AA01787001, AI083554 do TL Denning, DK055679 do A. Nusrat, DK064730 do IR Williamsa, DK72654 i DK79392 do CA Parkos), Nagrodę za Rozwój Zawodowy z Fundacji Lochów Crohna i Colitis w Ameryce oraz grant Emory Egleston Children s Research Center dla TL Denning. Przypisy Konflikt interesów: Autorzy zadeklarowali brak konfliktu interesów. Informacje referencyjne: J Clin Invest. 2011; 121 (12): 4787. 4795. doi: 10.1172 / JCI59150.
[patrz też: tomografia komputerowa cennik, program promocji zdrowia, makabi warszawa ]
[hasła pokrewne: szczepienie dur brzuszny, witaminy dla nastolatków, makabi ]

Posted in: Bez kategorii Tagged: makabi, szczepienie dur brzuszny, witaminy dla nastolatków

Partnerzy serwisu:



Zobacz tez:

Oś jelita / mózg i mikroflora czesc 4

W modelach zwierzęcych stres prenatalny i poporodowy mogą zmieniać skład i całkowitą biomasę mikroflory jelitowej (82, 83). W większości badań porównano zachowanie dorosłych, odkrycia mózgu i reakcje fizjologiczne, takie jak aktywacja osi HPA, pomiędzy zwierzętami urodzonymi i wychowanymi w środowisku GF i zwierzętami hodowanymi w środowisku klatki laboratoryjnej. W mniejszej liczbie badań podano dane wskazujące ... [Read more...]

Połączenie stymulacji a-1-adrenergicznej z apoptotyczną śmiercią komórek serca poprzez niezależną aktywację kinazy białkowej Ca2 + / kalmoduliny kinazy II ad 6

Stwierdziliśmy, że długotrwała stymulacja 1AR znacząco podnosi zawartość Ca2 + uwalniającą kofeinę SR o 38%. Obrazowanie konfokalne dodatkowo ujawniło, że wywołane kofeiną uwalnianie Ca2 + było przestrzennie jednorodne (przy rozdzielczości optycznej), niezależnie od stymulacji a1AR (Figura 4d). Paraliżowanie SR Ca2 + poprzez hamowanie pompy SR Ca2 + za pomocą thapsigargin chroniło również miocyty przed apoptozą ... [Read more...]

Połączenie stymulacji a-1-adrenergicznej z apoptotyczną śmiercią komórek serca poprzez niezależną aktywację kinazy białkowej Ca2 + / kalmoduliny kinazy II ad

Transfer genów za pośrednictwem adenowirusa realizowano przez dodanie wektorów adenowirusowych niosących albo mysi gen a-1AR (Adv-aARAR), gen markerowy a-gal (Adv – gal), albo gen. ARK-ct (Adv ARK-ct, uprzejmie dostarczony przez RJ Lefkowitza i WJ Kocha, Duke University, Durham, North Carolina, USA) do komórek DKO 1. 2. Alternatywnie, znakowany hemaglutyniną (znakowany HA) wektor CaMKII-PB (AdvA CaMKII-AB) ... [Read more...]

DevURL

Polecane:

https://medicare.med.pl/cennik/fizjoterapia/
dom opieki

Tags

bakteryjne zapalenie pochwy leki choroba dwubiegunowa przyczyny dieta paleo jadłospis na tydzień etnoliga football trening ile kcal ma bułka grahamka karpacz informacja turystyczna leclerc szczecin godziny otwarcia luxmed lublin odbiór wyników makabi makabi warszawa najlepszy prezent dla kobiety nietrzymanie moczu zabieg proces pielęgnowania pacjenta z nadciśnieniem tętniczym program promocji zdrowia rezonans magnetyczny otwarty warszawa rezonans magnetyczny przeciwwskazania stargard szczeciński szpital szczepienie dur brzuszny szpital lublin jaczewskiego tomografia komputerowa cennik witaminy dla nastolatków

Copyright © 2021 Klinika makabi warszawa.