Aktywacja kinazy MAP p38 przez toksynę Clostridium difficile A pośredniczy w martwicy monocytów, wytwarzaniu IL-8 i zapaleniu jelit cd

Wszystkie doświadczenia z transfekcją przeprowadzono trzykrotnie. Plazmidy kodujące dominujące negatywne mutanty MKK3 i MKK6 zostały dostarczone przez Rogera Davisa (University of Massachusetts Medical School, Worcester, Massachusetts, USA). C3 katalizowany egzoenzymem test ADP-rybozylacji Po ekspozycji na toksynę A, odwirowano 5 x 106 komórek THP-1 lub hodowanych monocytów izolowanych z 10 ml krwi i zawieszono w 50 … [Read more…]

Aktywacja kinazy MAP p38 przez toksynę Clostridium difficile A pośredniczy w martwicy monocytów, wytwarzaniu IL-8 i zapaleniu jelit

Toksyna A Clostridium difficile powoduje ostrą infiltrację neutrofili i uszkodzenie błony śluzowej jelit. W hodowanych komórkach toksyna A dezaktywuje białka Rho przez monoglukozylację. W monocytach toksyna A indukuje wytwarzanie IL-8 i martwicę za pomocą nieznanych mechanizmów. Badaliśmy rolę kinaz białkowych aktywowanych mitogenem (MAP) w tych zdarzeniach. W monocytowych komórkach THP-1 toksyna A aktywowała 3 główne … [Read more…]

Antymitogenne działanie HDL i APOE za pośrednictwem aktywacji IP zależnej od Cox-2 ad 8

Myszom C57BL / 6 wstrzyknięto adenowirusowe konstrukty eksprymujące APOA-I, APOE lub wektor zerowy. Całkowity RNA wyizolowano z aort i poddano odwrotnej transkrypcji na cDNA. Zmiany poziomów mRNA Cox-1, Cox-2 i GAPDH określono zgodnie z metodami. Dyskusja Wyniki opisane powyżej pokazują, że APOE pośredniczy w antymitogennym działaniu HDL na hamowanie wejścia fazy S i że molekularne … [Read more…]

Antymitogenne działanie HDL i APOE za pośrednictwem aktywacji IP zależnej od Cox-2 ad 7

Wyniki pokazują średnią. SEM, n = 2, * P <0,005 w porównaniu z komórkami traktowanymi 10% FBS (kontrola) i 2. M APOE. (b) Inkorporacja BrdU w jądrach została określona za pomocą mikroskopii immunofluorescencyjnej. Wyniki pokazują średnią.

Antymitogenne działanie HDL i APOE za pośrednictwem aktywacji IP zależnej od Cox-2 ad 6

Ogólnie wyniki te sugerują, że zależne od APOE hamowanie zajętości CRE i fosforylacji CREB / ATF-1 może wyjaśniać niezależny od kieszeni wpływ APOE na ekspresję genu cykliny A. Rzeczywiście, odkryliśmy, że APOE hamuje również wywołaną surowicą fosforylację CREB i ATF-1 w fazie G1 (Figura 4c). Figura 4: Zależne od CHR działanie APOE na transkrypcję genu … [Read more…]

Antymitogenne działanie HDL i APOE za pośrednictwem aktywacji IP zależnej od Cox-2 ad 5

Komórki były również traktowane TGF-y, antymitogenem, który działa głównie poprzez hamowanie fosforylacji kieszonkowych białek (27). Jak pokazano na Figurze 3a, E7 spowodował wzrost aktywności promotora cykliny A ponad czterokrotnie w komórkach traktowanych surowicą, APOA-I, C-końcową domeną APOE lub TGF-a, przypuszczalnie z powodu pełnej sekwestracji kieszeni białka i uwolnienia E2F. Chociaż E7 stymulował także aktywność promotora … [Read more…]

Antymitogenne działanie HDL i APOE za pośrednictwem aktywacji IP zależnej od Cox-2 czesc 4

Wpływ HDL był zależny od dawki, przy IC50 około 20 .g / ml. Oczyszczone rekombinowane APOE również zahamowały wejście fazy S w sposób zależny od dawki, podczas gdy oczyszczona rekombinowana APOA-I nie miała żadnego działania (Figura 1c). Wytworzyliśmy N-końcowe 22-kDa i 10-kDa C-końcowe domeny APOE jako rekombinowane białka i odkryliśmy, że antymitogenna aktywność APOE była … [Read more…]

Antymitogenne działanie HDL i APOE za pośrednictwem aktywacji IP zależnej od Cox-2 cd

Wejście fazy S komórek transfekowanych (eGFP-dodatnich) określono przez inkorporację BrdU. W przypadku testów zmian ruchliwości elektroforetycznej (EMSA) i testów super-przesunięcia, mysie aorty SMC doprowadzono do 80-90% konfluencji w naczyniach o średnicy 150 mm, pozbawiono surowicy i bezpośrednio stymulowano przez 18 godzin 10% FBS pod nieobecność lub obecność APOA-I lub APOE. Lizaty jądrowe przygotowano i inkubowano … [Read more…]

Antymitogenne działanie HDL i APOE za pośrednictwem aktywacji IP zależnej od Cox-2 ad

Pierwotne mysie aorty SMC wyizolowano z myszy WT C57BL / 6 lub myszy pozbawionych IP, utrzymywano jak opisano (15) i stosowano pomiędzy pasmem 2 i 5. Czystość populacji SMC potwierdzono przez ekspresję aktyny. Mięśniowej mięśni jak wykryto. przez immunofluorescencję (nie pokazano). Bliskie zlewie monowarstw wczesnego pasażowania mysich aortalnych SMC lub szczurzych SMC A10 (American Type … [Read more…]

Antymitogenne działanie HDL i APOE za pośrednictwem aktywacji IP zależnej od Cox-2

HDL i związane z nim apo, APOE, hamują wejście do fazy S mysich komórek mięśni gładkich aorty. Podaje się tutaj, że antymitogenny wpływ mapy APOE na N-końcową domenę wiążącą receptor ., że APOE i jego N-końcowa domena hamują aktywację promotora cykliny A i że te efekty obejmują zarówno zależne od niezależnych, jak i niezależne szlaki … [Read more…]