E-kadheryna (BD Biosciences) była używana jako kontrola obciążenia. Bloty opracowano przy użyciu odczynnika chemiluminescencyjnego SuperSignal West Femto (Pierce Biotechnology). Obrazy zostały wykonane przy użyciu aparatu FluorChem 8900 (Alpha Innotech). ELISA. Równą liczbę komórek przemyto 3 razy i pozostawiono do kondycjonowania środowiska przez 90 minut.
MMP i ADAM badano intensywnie i scharakteryzowano wiele niskocząsteczkowych inhibitorów zarówno w hodowli komórkowej, jak i modelach zwierzęcych, głównie w celu zahamowania inwazji komórek nowotworowych zależnej od MMP. Pomimo względnego sukcesu badań przedklinicznych, wyniki wielu badań klinicznych inhibitorów MMP w leczeniu raka rozczarowały, być może z powodu tego, co wydaje się być wadliwym projektem badań … [Read more…]
Wykazaliśmy, że aktywacja sygnalizacji EGFR w złośliwych komórkach T4-2 serii progresji raka sutka HMT3522 była napędzana przez autokrynną pętlę czynnika wzrostu zależną od TACE, nieobecną w niezłośliwych komórkach S1. Zahamowanie TACE osłabiło wzrost komórek T4-2 w hodowli ECM 3D i przywróciło ich morfologię, aby zbliżyć się do komórek niezłośliwych. To odwrócenie zostało przezwyciężone przez nadekspresję … [Read more…]
Przeanalizowaliśmy kompleksowy zestaw danych mikromacierzy z ekspresją genową 295 pierwotnych nowotworów sutka, przygotowanych przez van de Vijvera i współpracowników, którzy wykorzystali go do identyfikacji sygnatur ekspresji genów prognozujących wynik (15). Szczegółowa charakterystyka kliniczna tych nowotworów została opisana, ale krótko: wszystkie były stadium I lub II, o średnicy mniejszej niż 5 cm po wycięciu i pochodziły … [Read more…]
Bardzo podobne wartości odnotowano wcześniej dla komórek MDCK. Wnioskujemy, że nadekspresja claudyny-4 powoduje zmniejszenie przewodnictwa elektrycznego transmonolayera, które można przypisać selektywnemu rozróżnianiu przejścia parakomórkowego Na + bez znaczącego wpływu na przenikalność Cl .. Ponadto zmniejsza się przenikalność wszystkich kationów metali alkalicznych, co wynika z braku wpływu claudin-4 na ich przepuszczalność w stosunku do Na +. … [Read more…]
Nieindukowane komórki MDCK wykazały wzór zamarzania typowy dla komórek MDCK (24), z kilkoma równoległymi włókienek i skrzyżowanymi mostkami poprzecznymi zorientowanymi wzdłuż granicy wierzchołkowo-bocznej. Przeciwnie, w komórkach z nadekspresją claudiny-4 całkowita zawartość nici została zwiększona, a wzór był bardziej złożony (Figura 3b). Oprócz równoległego pasma wierzchołkowego liczne dodatkowe pasma przechodzą w dół i cofają się na … [Read more…]
Wyniki Indukowana ekspresja claudiny-4 nie zmienia poziomów innych białek o zaciśniętych złączach. Claudin-4 jest normalnie wykrywalny w komórkach MDCK (23). W związku z tym najlepiej byłoby wprowadzić oznaczoną epitopowo wersję claudin-4, aby można było odróżnić jej ekspresję i lokalizację komórkową od białka endogennego. Jednak zdecydowaliśmy się nie używać oznaczonych konstrukcji z określonych powodów. Najpierw zaobserwowaliśmy … [Read more…]
Temperaturę utrzymywano na poziomie 37 ° C. Zmieszanie roztworu i pH regulowano przez przepuszczanie w komorach nasyconego wodą 95% O2 ~ 5% CO2. Elektrody napięciowe i prądowe to elektrody Ag / AgCl z mikroporowatymi ceramicznymi końcówkami. Typowe eksperymenty składały się z następującej procedury. Na początku każdego eksperymentu określano oporność płynu i potencjały elektrodowe dla filtrów … [Read more…]
Jest to pierwsza demonstracja, że claudin może nadawać selektywność jonową do transportu pozakomórkowego i prowadzi do przewidywania, że kombinacja różnych claudyn definiuje ogólną selektywność różnych połączeń. Metody Konstrukty cDNA plazmidu. Ludzką chromatynę-4 o pełnej długości amplifikowano metodą PCR z użyciem cDNA ludzkiej nerki (Quick-clone cDNA; CLONTECH Laboratories Inc., Palo Alto, California, USA) jako matrycy i … [Read more…]
Wewnątrzkomórkowe stany Ca2 + zmierzono w podzbiorze komórek elektrycznie stymulowanych przy 0,5 Hz przez co najmniej 10 minut pod nieobecność (n = 29 komórek od czterech serc) i obecności (n = 22 komórek od czterech serc) z podtrzymywanym a1AR. stymulacja według ISO. * P <0,05 vs miocyty nietraktowane ISO. (c) Wpływ nifedypiny, EGTA-AM (1 .M) … [Read more…]