Klinika makabi warszawa

Przebudowa białka transmembranowego w leczeniu dystrofii mięśniowej z pominięciem eksonu ad 6

1 września 2019 by admin

Ekspresję RNA SGCG wykryto w przeprogramowanych przez MyoD fibroblastach zarówno z kontroli jak i pacjenta LGMD 2C (ex6del). Stopień ekspresji RNA SGCG był jakościowo mniejszy w przypadku ex6del, zgodnie z obecnością pojedynczego funkcjonalnego allelu SGCG i / lub rozpadu z udziałem nonsensu. Figura 7A-mediowana korekcja ramki odczytu w ludzkich zmutowanych komórkach SGCG. (A) Pokazano 2 różne allele od osobnika z LGMD 2C wpływającego na locus SGCG, delecję 1,4 MB obejmującą wiele genów (niebieski zacieniony obszar, góra) i mniejszą delecję obejmującą ekson 6 SGCG w całości (niebieski zacieniony obszar, średni schemat). Liczby odnoszą się do pozycji genomu w hg19. Organizacja eksonów dla transkryptów SGCG z delecją egzonu 6 (ex6del) jest pokazana w dolnym schemacie. Gwiazdka oznacza stronę początkową transkrypcji. Czerwona strzałka wskazuje przedwczesny kodon stop. (B) Fibroblasty skóry z kontroli i ex6del uzyskano i przeprogramowano do linii miogennej przy użyciu indukowalnego tamoksyfenem MyoD (31, 32). Ekspresja ekspresji (czerwona) i wielordzeniowa tworzenie miotubiny wskazały miogeniczne przeprogramowanie po wystawieniu na działanie 4OH-tamoksyfenu (5 .M, 48 godzin) i hodowlę w pożywce różnicowania. Nuklei oznaczono Hoechst 3342 (niebieski). Skala słupków: 10. M. (C) RT-PCR wykazała transkrypty SGCG z mutanta kontrolnego i mutanta ex6del w przeprogramowanych (po prawej) fibroblastach po różnicowaniu (5 (4M 4OH-tamoksyfen, 48 godzin, 12-dniowe różnicowanie). (D) przeprogramowane przez MyoD fibroblasty traktowano AON skierowanymi na eksony 4, 5 i 7 (100 nM / AON, łącznie 300 nM). RT-PCR wykazał oczekiwane pominięte produkty, w tym najmniejszy produkt reprezentujący eksony 2, 3 i 8 i usunięty dla eksonów 4, 5 i 7 (czerwona strzałka). Wyniki z 3 niezależnych powtórzeń przedstawiono dla leczenia AON. NTC, kontrola bez szablonu. Czarna strzałka wskazuje na pojedynczy ekson pomijający ekson 7 w transkrypcie SGCG ex6del, który występuje przy braku leczenia AON. AON stosujące chemię 2-O-O-metylofosforotionianową (2-OMe) były ukierunkowane na obszary wewnątrzeksonowe w eksonach SGCG 4, 5 i 7, zgodnie z wcześniej opisanymi zasadami projektowania antysensownego (33). Transfekcja przeprogramowanych komórek ex6del za pomocą pojedynczych AON 2OMePS wykazała zależne od dawki pomijanie poszczególnych eksonów 5 i 7, z mniejszym pojedynczym pomijaniem egzonu 4 (dodatkowa Figura 6). Co ciekawe, istniały dowody na endogenne pomijanie eksonu 7 w przypadku braku AON w eksonie 7 (dodatkowa figura 6). W celu wygenerowania skorygowanego transkryptu ex6del z pominiętymi wieloma fragmentami odczytu i odczytu, przeprogramowane komórki traktowano mieszaniną AON skierowanych na egzony 4, 5 i 7 (100 nM / AON, łącznie 300 nM). Analiza transkryptów zamplifikowanych przez PCR 3 dni po leczeniu wykazała wytwarzanie skróconego wewnętrznie transkryptu z pożądaną korektą ramki odczytu ex6del SGCG (figura 7D), oprócz produktów pośrednich z pominięciem. Produkt z pominięciem 3-egzonów potwierdzono przez sekwencjonowanie (pomocnicza figura 7). Stosowany tu system hodowli komórkowej wykazuje zmniejszone przeżycie z utrzymującym się wysokim poziomem leczenia MyoD i AON, ograniczając w ten sposób zdolność do mierzenia wyników po więcej niż kilku dniach i ograniczając wykrywanie białka Mini-Gamma. Łącznie dane te pokazują potencjał korygowania mutacji przesunięcia ramki SGCG za pomocą strategii pominięcia wielu znaków. Dyskusja Terapia genowa w dystrofii mięśniowej często opierała się na strategiach wirusowych w zastępowaniu genów. W przypadku DMD było to szczególnie problematyczne ze względu na duży rozmiar genu i białka dystrofiny, a także ograniczoną pojemność wektorów wirusowych. W przypadku LGMD 2C, które jest spowodowane mutacjami SGCG i skutkuje utratą znacznie mniejszego białka a-sarkoglikanu, zainicjowano wirusową terapię genową (34). Jednak wirusowa terapia genowa w przypadku każdej choroby mięśni jest kwestionowana przez potrzebę dostarczenia produktu do wszystkich grup mięśni. Ze względu na te przeszkody, pomijanie eksonu wyłania się jako strategia korekcji genetycznej użyteczności klinicznej. Postęp w badaniach klinicznych nad DMD sugeruje, że pominięcie egzonu można zastosować do innych zaburzeń, w tym zaburzeń nerwowo-mięśniowych. Założenie pominięcia eksonu dla DMD wywodzi się z obserwacji u pacjentów z BMD z delecjami w ramce, które zachowały funkcjonalnie ważne aminokwasy i karboksy-końcowe dystrofiny. Połączona przez X recesywna natura DMD, w połączeniu z powtarzalną strukturą domeny pręcików dystrofiny, czyni DMD idealnym celem pomijania eksonu. Chociaż jest to atrakcyjna metoda korekcji genetycznej, pomijanie eksonu w DMD zazwyczaj daje znacznie niższy poziom białka dystrofiny w porównaniu z endogennymi poziomami dystrofiny.
[więcej w: football trening, leclerc szczecin godziny otwarcia, makabi warszawa ]
[patrz też: football trening, program promocji zdrowia, choroba dwubiegunowa przyczyny ]

Posted in: Bez kategorii Tagged: choroba dwubiegunowa przyczyny, football trening, program promocji zdrowia

Partnerzy serwisu:



Zobacz tez:

Komórki rezydualne prezentujące antygen płuc mają zdolność do promowania różnicowania komórek T2 in situ ad 8

Nie można jednak wykluczyć, że komórki te stanowią unikatowy podzbiór dendrytycznych komórek dróg oddechowych lub populację niekompletnie zaangażowanych komórek prekursorowych pochodzenia monocytarnego. Ważne jest, aby zauważyć, że wiele z wcześniejszych badań badających komórki dendrytyczne płuc / APC celowo koncentrowało się na podzbiorze APC wyrażających najwyższe poziomy MHC klasy II (17), dostarczając prawdopodobne wyjaśnienie widocznej rozbieżności ... [Read more...]

Skierowanie na zależne od TACE uwalnianie ligandu EGFR w raku piersi czesc 4

Analiza ELISA kondycjonowanej pożywki z doświadczenia pokazanego w C. AREG i TGF-a. są kluczowymi substratami TACE w komórkach T4-2. Oprócz uwalniania czynników wzrostu, TACE jest zaangażowany w zrzucanie kilku innych cząsteczek na powierzchni komórki, których hamowanie może również przyczyniać się do obserwowanej rewersji fenotypu komórki T4-2. Charakterystyczne substraty TACE obejmują TNF-a (18, 19), selektyny L ... [Read more...]

Regulowana ekspresja claudiny-4 zmniejsza przewodnictwo parakomórkowe poprzez selektywny spadek przepuszczalności sodu ad

Jest to pierwsza demonstracja, że claudin może nadawać selektywność jonową do transportu pozakomórkowego i prowadzi do przewidywania, że kombinacja różnych claudyn definiuje ogólną selektywność różnych połączeń. Metody Konstrukty cDNA plazmidu. Ludzką chromatynę-4 o pełnej długości amplifikowano metodą PCR z użyciem cDNA ludzkiej nerki (Quick-clone cDNA; CLONTECH Laboratories Inc., Palo Alto, California, USA) jako matrycy i ... [Read more...]

DevURL

Polecane:

projektowanie i aranźacja wnętrz

Tags

bakteryjne zapalenie pochwy leki choroba dwubiegunowa przyczyny dieta paleo jadłospis na tydzień etnoliga football trening ile kcal ma bułka grahamka karpacz informacja turystyczna leclerc szczecin godziny otwarcia luxmed lublin odbiór wyników makabi makabi warszawa najlepszy prezent dla kobiety nietrzymanie moczu zabieg proces pielęgnowania pacjenta z nadciśnieniem tętniczym program promocji zdrowia rezonans magnetyczny otwarty warszawa rezonans magnetyczny przeciwwskazania stargard szczeciński szpital szczepienie dur brzuszny szpital lublin jaczewskiego tomografia komputerowa cennik witaminy dla nastolatków

Copyright © 2021 Klinika makabi warszawa.