Pominięcie eksonu wykorzystuje antysensowne oligonukleotydy jako leczenie chorób genetycznych. Antysensowne oligonukleotydy stosowane do pomijania egzonu są zaprojektowane do ominięcia przedwczesnych kodonów stop w docelowym RNA i przywrócenia przerwania ramki odczytu. Pomijanie egzonu jest obecnie testowane na ludziach z mutacjami genu dystrofiny, którzy mają dystrofię mięśni Duchenne a. W przypadku dystrofii mięśniowej Duchenne a uzasadnienie pominięcia egzonu pochodzi z obserwacji u pacjentów z naturalnie występującymi mutacjami genu dystrofiny, które wytworzyły wewnętrznie usunięte, ale częściowo funkcjonalne białka dystrofiny. Obecnie rozszerzyliśmy możliwości pominięcia egzonu poprzez sprawdzenie, czy wewnętrzne, w ramce skrócenie białka a-markera transbłonowego jest funkcjonalne. Wytworzyliśmy wewnętrznie skrócone białko .-sarkoglikanu, które nazwaliśmy Mini-Gamma poprzez usunięcie dużej części zewnątrzkomórkowej domeny. Mini-Gamma dostarczyła funkcjonalnych i patologicznych korzyści, aby skorygować utratę (3-sarkoglikanu w modelu Drosophila, w badaniach ekspresji heterologicznych komórek oraz w myszach transgenicznych pozbawionych a-markaroglikanu. Stworzyliśmy komórkowy model choroby mięśni ludzkich i wykazaliśmy, że wiele pomijanych eksonów może być indukowanych w RNA kodującym zmutowany ludzki a-markaroglikan. Ponieważ Mini-Gamma reprezentuje usunięcie 4 z 7 kodujących egzonów w a-sarkoglikan, to podejście zapewnia skuteczną strategię leczenia większości pacjentów z mutacjami genów P-sarkoglikanu. Wprowadzenie Mutacje, które zaburzają kompleks glikoproteiny dystrofiny (DGC), powodują dystrofię mięśniową (1. 3). Dystrofina i związane z nią białka lokalizują się w błonie komórkowej mięśni, działając jako łącznik między wewnątrzkomórkowym cytoszkieletem a matrycą pozakomórkową (4, 5). Duże delecje w genie dystrofiny odpowiadają za dystrofię mięśniową Duchenne a (DMD). Mutacje, które powodują wewnętrzne delecje i utrzymują ramę odczytu dystrofiny powodują łagodniejszą dystrofię mięśniową Beckera (BMD). Te obserwacje w BMD stanowiły podstawę do opracowania terapii antysensownym oligonukleotydem (AON) do leczenia DMD w celu indukowania zdarzeń pominięcia eksonu w celu przywrócenia ramki odczytu. Pomijanie eksonu DMD, według projektu, generuje wewnętrznie skrócone i częściowo funkcjonalne białko. Klinicznie przewiduje się, że pomijanie eksonu będzie przekształcać ciężkich pacjentów z DMD w łagodniejszych pacjentów z BMD, co doprowadzi do przedłużonego chodzenia i lepszego utrzymania siły mięśni. Próby kliniczne, które testują pomijanie eks w DMD postępują (6. 10). Dystrofina, z jej wysoce powtarzalną wewnętrzną strukturą złożoną z 24 powtórzeń spektralnych, jest idealna do pominięcia egzonu. Ponadto, ponieważ gen kodujący dystrofinę znajduje się na chromosomie X, AON potrzebują jedynie celu mRNA wytwarzanego z allelu. Subcompleks sarkoglikanu w DGC składa się z 4 jednojądrzowych podjednostek transbłonowych: a-, a-, a- i a-sarkoglikanu (11, 12). Recesywne mutacje powodujące utratę funkcji w genach kodujących a-, a-, a- i a-sarkoglikan powodują, odpowiednio, dystrofie mięśni kończyn dolnych (LGMD), odpowiednio, 2D, 2E, 2C i 2F (13-16). W tym miejscu zbadaliśmy prawdopodobieństwo zastosowania strategii pomijania eksonów w leczeniu pacjentów LGMD 2C z mutacjami w SGCG, genie kodującym a-markaroglikan. Najpowszechniejszą mutacją u pacjentów LGMD 2C jest delecja tyminy z łańcucha 5 tymin nukleotydowych zasad 521-525 w eksonie 6 genu a-sarkoglikanu, określana jako 521-P (15). Ta mutacja przesuwa ramkę odczytu i skutkuje brakiem białka a-sarkoglikanu i wtórnej redukcji a- i a-sarkoglikanów (15). Pominięcie tej mutacji i przywrócenie ramki odczytu wymaga pominięcia eksonów 4, 5, 6 i 7. To wewnętrznie skrócone białko, które określamy jako Mini-Gamma, zachowuje wewnątrzkomórkowy, transbłonowy i skrajny koniec karboksylowy. Aby ocenić zdolność Mini-Gammy do zastąpienia pełnowymiarowego a-markaroglikanu, wygenerowaliśmy zarówno transgeniczne muchy, jak i myszy eksprymujące Mini-Gamma, znajdując funkcjonalne i molekularne dowody w celu ratowania niedoboru P-sarkoglikanu. Dostarczamy również dowodów potwierdzających, że pominięcie egzonu można indukować w zmutowanych komórkach ludzkich SGCG. Wyniki Ekspresja mysiej Mini-Gamma ratuje model dystrofii mięśniowej Drosophila. A-Sarkoglikan jest białkiem transbłonowym typu II o krótkiej domenie wewnątrzkomórkowej, pojedynczym pasie transbłonowym i większej zewnątrzkomórkowej domenie na końcu karboksylowym. Transgen został zaprojektowany do ekspresji wewnętrznie obciętego a-sarkoglikanu. Wewnętrznie skrócone białko, określane jako Mini-Gamma, odzwierciedla delecję regionów białkowych kodowanych przez eksony 4, 5, 6 i 7 (Figura 1A)
[więcej w: bakteryjne zapalenie pochwy leki, ile kcal ma bułka grahamka, nietrzymanie moczu zabieg ]
[hasła pokrewne: najlepszy prezent dla kobiety, ile kcal ma bułka grahamka, luxmed lublin odbiór wyników ]
