Nie zaobserwowano różnic w przepływie mannitolu między klonami lub z indukcją Claudin-4 lub bez niej. Dyskusja W tym badaniu zaczynamy zajmować się kwestią, czy członkowie rodziny claudin nadają selektywność jonową szlakowi parakomórkowemu. Zaobserwowaliśmy, że nadekspresja claudyny-4 w komórkach MDCK zmniejsza przewodnictwo transmonolayera przez zmniejszenie parakomórkowej przepuszczalności Na +. Nie ma wpływu na przepuszczalność dla Cl. lub strumień dla nienaładowanej substancji rozpuszczonej. Bliska korelacja między poziomem ekspresji claudin-4 a zmianą zarówno przewodnictwa, jak i selektywności jonowej sugeruje, że jest bezpośrednio odpowiedzialna za te zmiany. Te wyniki są zgodne z modelem, w którym claudin-4 tworzy kanały przez ścisłe połączenie, które rozróżnia jony Na + i są obojętne na Cl. jony. Wyniki badań potencjału bi-jonowego wskazują, że przepuszczalność została również zmniejszona proporcjonalnie dla innych kationów metali alkalicznych, K +, Li +, Rb + i Cs +. Chociaż ostatnie badania Inai i in. (12) i McCarthy et al. (13) wykazali, że nadekspresja zwiększona przez klaudynę-1 w komórkach MDCK, niniejsze dane są pierwszymi bezpośrednimi dowodami, według naszej wiedzy, że nadekspresja claudyny może powodować parakomórkową dyskryminację jonową. Poprzednie badania udokumentowały zróżnicowaną dystrybucję poszczególnych claudin (5,14) i doprowadziły do spekulacji, że mogą być odpowiedzialne za zmienne właściwości elektryczne ciasnych połączeń w różnych tkankach. Demonstracja zdolności Claudin-4 do zmiany selektywności Na + wspiera ten model i jest ważnym pierwszym krokiem w zrozumieniu mechanizmów leżących u podstaw odpowiedzialnych za specyficzne tkankowo właściwości ciasnych połączeń. Kilka linii dowodów silnie sugeruje, że claudin-4 wpływa na szlak okołokomórkowy. Po pierwsze, przewodnictwo parakomórkowe znacznie przewyższa przewodnictwo transkomórkowe w komórkach MDCK, dlatego jeśli claudin-4 zwiększa TER, musi to zrobić przez wpływ na ciasne połączenia (20). Po drugie, liczba pasm połączenia jest zwiększona przez nadekspresję claudiny-4, podczas gdy poziomy kilku innych białek pępkowych pozostają nienaruszone. Zakładamy zatem, że dodatkowe pasma wytwarzane są głównie z claudin-4 w pozycji mającej wpływ na charakterystykę bariery połączenia. Nie wyklucza to możliwości, że claudyna na powierzchni bocznej komórki, niezłożona w nici, może wpływać na przepuszczalność parakomórkową, i można to przetestować doświadczalnie, stosując gradienty osmotyczne, aby zmniejszyć lub spuchnąć boczną przestrzeń międzykomórkową. Po trzecie, chwilowe zależności prąd-napięcie były liniowe i symetryczne zarówno w nieindukowanych, jak i indukowanych komórkach MDCK. Oczekuje się, że nośniki transbłonowe będą miały ograniczoną zdolność do przewodzenia prądu i prowadzą do nieliniowej relacji IV. Obserwowany brak nasycenia jest zgodny z główną drogą przewodzenia między komórkami, a nie przez nośniki błonowe. Wreszcie, amiloryd, bumetanid i SITS zostały użyte do zablokowania głównych transkomórkowych kanałów transportujących jony. Ponieważ obecność tych inhibitorów nie wpływa na potencjał rozcieńczania zarówno w indukowanych, jak i indukowanych komórkach, jest prawdopodobne, że potencjały te były generowane przez ruchy komórkowe międzykomórkowe, np. Na + i Cl. jony. Należy zauważyć, że zdecydowaliśmy się zignorować jakikolwiek wkład w potencjał rozcieńczania z jonów innych niż Na + i Cl. Jest to powszechnie wykonywane i ważne dla pierwszego przybliżenia, ponieważ inne jony są obecne w niższych stężeniach, a ich stosunki transmonolayerowe były utrzymywane na stałym poziomie podczas nakładania gradientu NaCl. Możliwe, że inne jony konkurują z Na + i Cl. inaczej przy dwóch stężeniach NaCl. Oczekuje się, że to anomalne zachowanie w równym stopniu przyczyni się do potencjału rozcieńczania zarówno w komórkach nieindukowanych jak i indukowanych. Zatem wzrost PCl / PNa obserwowany przy nadekspresji claudin-4 musi ujawnić prawdziwą zmianę we względnej selektywności, nawet jeśli dokładne wielkości są przybliżeniami. Nadeksprymowanie claudiny-4 nie stymuluje ogólnego wzrostu poziomu innych składników ciasnych połączeń, zgodnie z poprzednim badaniem McCarthy ego i wsp. na claudin-1 (13). Warto zauważyć, że poziomy ZO-1 nie zmieniają się w obliczu indukcji Claudin-4. Jedną postulowaną rolą białek ZO jest zbrojenie integralnych białek błonowych i połączenie ich z cytoszkieletem aktynowym (17, 29, 30). Fizjologiczne efekty dużego wzrostu poziomu klaudyny-4 bez zwiększenia ZO-1 sugerują, że albo to wiązanie nie jest wymagane dla funkcji barierowej, albo że białka ZO lub inne składniki zaangażowane w wiązanie nie są ograniczające.
[przypisy: nietrzymanie moczu zabieg, stargard szczeciński szpital, ile kcal ma bułka grahamka ]
[patrz też: witaminy dla nastolatków, makabi, makabi warszawa ]
