Warning: Declaration of WPRandomPostsWidget::update($new_instance) should be compatible with WP_Widget::update($new_instance, $old_instance) in /home/hydra17/ftp/makabiwarszawa.pl/wp-content/plugins/wp-random-posts/randomposts.php on line 38
Regulowana ekspresja claudiny-4 zmniejsza przewodnictwo parakomórkowe poprzez selektywny spadek przepuszczalności sodu ad – Klinika makabi warszawa

Klinika makabi warszawa

Regulowana ekspresja claudiny-4 zmniejsza przewodnictwo parakomórkowe poprzez selektywny spadek przepuszczalności sodu ad

14 września 2019 by admin

Jest to pierwsza demonstracja, że claudin może nadawać selektywność jonową do transportu pozakomórkowego i prowadzi do przewidywania, że kombinacja różnych claudyn definiuje ogólną selektywność różnych połączeń. Metody Konstrukty cDNA plazmidu. Ludzką chromatynę-4 o pełnej długości amplifikowano metodą PCR z użyciem cDNA ludzkiej nerki (Quick-clone cDNA; CLONTECH Laboratories Inc., Palo Alto, California, USA) jako matrycy i startera 56948 (5a-CGGGATCCCTGACAATGGCCTCCATGGGGCTAC-3 .), startera. 56949 (5a-GCTCTAGATTACACGTAGTTGCTGGCAGC-3a) i polimeraza Taq (Promega Corp., Madison, Wisconsin, USA). Zamplifikowany produkt wklonowano do wektora TOPO-TA (Invitrogen Corp., San Diego, California, USA) i subklonowano przy użyciu EcoRI do wektora pTRE (CLONTECH Laboratories Inc.). Sekwencję DNA sprawdzono w obu kierunkach. Hodowla komórek i generowanie stabilnych linii. Ludzką chromatynę-4 transfekowano do komórek tet-off MDCK II (CLONTECH Laboratories Inc.) wraz z 20-krotnie mniejszym plazmidem do selekcji pTKhyg, stosując protokół Lipofectamine (Life Technologies Inc., Grand Island, Nowy Jork, USA). Klony poddane transfekcji Claudin-4 (3 wybrano w 0,2 mg / ml higromycyny B, a odporne klony utrzymywano w DMEM z wysokimi stężeniami glukozy uzupełnionym 10% FBS, penicyliną / streptomycyną, 0,1 mg / ml higromycyny i 50 ng / ml doksycykliny. Linie komórkowe badano przesiewowo metodą immunoblottingu. W celu przeprowadzenia eksperymentów komórki poddano trypsynizacji i przeniesiono na Snapwells (Corning Inc. Life Sciences, Acton, Massachusetts, USA) w ilości 5 x 104 komórek / studzienkę w pożywce zawierającej doksycyklinę (50 ng / ml) lub bez doksycykliny (DMEM o wysokiej zawartości glukozy; suplementowany penicyliną / streptomycyną i 10% FBS, CLONTECH Laboratories Inc., certyfikowana surowica wolna od tetracykliny). Komórki powleczone dla eksperymentów podawano codziennie z odpowiednimi pożywkami. Mikroskopia immunofluorescencyjna. Komórki hodowano na filtrach (Transwell-Clear, Corning Inc. Life Sciences) i wszystkie sposoby immunolokalizacji opisano wcześniej (17). ZO-1 wykryto mysim mAb (1: 300; Zymed Laboratories Inc., South San Francisco, California, USA); Claudin-4 wykrywano za pomocą króliczego przeciwciała poliklonalnego wobec ludzkiej claudin-4 (1: 100; Zymed Laboratories Inc.). Wtórne przeciwciała Ab były znakowane Cy3 anty-mysimi i znakowanymi Cy-2 . oczyszczonymi powinowactwem przeciwciałami swoistymi wobec gatunku króliczego przeciw króliczym (Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc., West Grove, Pennsylvania, USA). Całą mikroskopię wykonano mikroskopem Nikon Microphot FX z obiektywem x 60 PlanApo, a obrazy rejestrowano przy użyciu chłodzonej sensorycznie kamery CCD. Obrazy zostały następnie przetworzone przy użyciu oprogramowania OpenLab (Improvision Inc., Lexington, Massachusetts, USA) i Adobe Photoshop 5.0 (Adobe Systems Inc., San Jose, Kalifornia, USA). Mikroskopia elektronowa z mikroskopem z rozbiciem. Analizę metodą liofilizacji nieindukowanych i indukowanych komórek MDCK przeprowadzono jak opisano wcześniej (18). Wykonano badania zestawów replik z dwóch oddzielnych, nieindukowanych i indukowanych klonów komórek MDCK, a wzory zamrożonych pęknięć były podobne dla każdego z nich. Analiza immunoblotowa. W celu określenia profili ekspresji nadekspresjonujących linii komórkowych claudin-4, transfekowane komórki MDCK wysiano na dwanaście studzienkowych szalek na filtrach z tran-studzienkami. Nie obserwowano różnic w kinetyce lub poziomie indukcji białka związanych z podłożem do wysiewu. Ekspresję białka indukowano przez usuwanie doksycykliny przez 4 dni; Poziom białka claudin-4 był zawsze porównywany z poziomem obserwowanym w nieindukowanych komórkach tej samej linii klonalnej. Doksycyklina nie miała widocznego wpływu na liczbę komórek ani na wielkość komórek; na poziom endogennej chromatyny-4 nie wpływało leczenie doksycykliną w linii komórek rodzicielskich (dane nie pokazane). Przygotowanie próbki przeprowadzono w sposób opisany wcześniej (18). Gdy komórki hodowano na filtrach, cały filtr usunięto i umieszczono w 100. 200 ul buforu do próbek. Próbki przechowywano w temperaturze <80 ° C przed analizą. Równe objętości lizatu poddano SDS-PAGE (13% żele poliakryloamidowe dla claudin, 8% żele dla ZO-1 i okludyny) i przeniesiono na nitrocelulozę. Ab (wszystkie z Zymed Laboratories Inc.) zastosowane do analizy immunoblotów to: claudin-1/3 (1: 1000, ta część krzyża ab claudin-1 reaguje z claudin-3 i ewentualnie claudin-20) i claudin-4. poliklonalne (1: 1000) mAb Ab., mysi claudin-2 (1: 2500), mysie przeciwciało przeciw ludzkiemu ZO-1 (1: 1000) i mAb przeciwko ludzkiemu okludinowi (1: 1000). Kompleksy antygen-Ab wykrywano ze sprzężonymi z peroksydazą chrzanową sprzężonymi (sprzężonymi z HRP) wtórnymi Ab przez wzmocnioną chemiluminescencję (ECL) (Amersham Pharmacia Biotech Inc., Piscataway, New Jersey, USA). Pomiary elektrofizjologiczne. Badania przeprowadzono na monowarstwach komórek hodowanych na porowatych filtrach (Snapwell; Corning Inc [przypisy: luxmed lublin odbiór wyników, makabi, dieta paleo jadłospis na tydzień ] [przypisy: tomografia komputerowa cennik, karpacz informacja turystyczna, bakteryjne zapalenie pochwy leki ]

Posted in: Bez kategorii Tagged: bakteryjne zapalenie pochwy leki, karpacz informacja turystyczna, tomografia komputerowa cennik

Partnerzy serwisu:



Zobacz tez:

Połączenie stymulacji a-1-adrenergicznej z apoptotyczną śmiercią komórek serca poprzez niezależną aktywację kinazy białkowej Ca2 + / kalmoduliny kinazy II

Stymulacja receptora. 1-adrenergicznego (. 1AR) aktywuje klasyczną szlak kinazy cAMP / białka A (PKA) do regulowania ważnych procesów komórkowych od zmiany ekspresji genów do kontroli metabolizmu, skurczu mięśni i apoptozy komórkowej. Tutaj pokazujemy, że przedłużona stymulacja a1AR promuje apoptozę miocytów sercowych przez aktywację kinazy Ca2 + / kalmoduliny II (CaMKII), niezależnie od sygnalizacji PKA. Apoptoza ... [Read more...]

Połączenie stymulacji a-1-adrenergicznej z apoptotyczną śmiercią komórek serca poprzez niezależną aktywację kinazy białkowej Ca2 + / kalmoduliny kinazy II ad 7

Ekspresję znakowanego HA CaMKII-Ap potwierdzono również metodą Western blotting z użyciem przeciwciała monoklonalnego reagującego z HA (Figura 7b). Co godne uwagi, nadekspresja CaMKII-P przesunęła krzywą dawka-odpowiedź apoptozy indukowanej przez ISO o prawie jeden rząd wielkości (EC50, 1,1 nM i 9,0 nM dla miocytów zakażonych Adv. CaMKII. C i Adv. Gal.

Ektopia

Ektopia jest często wykrywana w rutynowych elektrokardiogramach. W celach medycznych, dwa lub więcej pobudzeń ektopowych przedsionkowych lub komorowych na standardowym EKG powinno prowadzić do dalszej oceny za pomocą monitora Holtera. W monitorowaniu Holtera, ektopii przedsionkowej i komorowej ocenia się ilościowo jako procent wszystkich uderzeń i często ocenia się je jako rzadkie (≤0,1%), sporadyczne (> 0,1% ... [Read more...]

DevURL

Polecane:

help in starting business in poland

Tags

bakteryjne zapalenie pochwy leki choroba dwubiegunowa przyczyny dieta paleo jadłospis na tydzień etnoliga football trening ile kcal ma bułka grahamka karpacz informacja turystyczna leclerc szczecin godziny otwarcia luxmed lublin odbiór wyników makabi makabi warszawa najlepszy prezent dla kobiety nietrzymanie moczu zabieg proces pielęgnowania pacjenta z nadciśnieniem tętniczym program promocji zdrowia rezonans magnetyczny otwarty warszawa rezonans magnetyczny przeciwwskazania stargard szczeciński szpital szczepienie dur brzuszny szpital lublin jaczewskiego tomografia komputerowa cennik witaminy dla nastolatków

Copyright © 2021 Klinika makabi warszawa.