Warning: Declaration of WPRandomPostsWidget::update($new_instance) should be compatible with WP_Widget::update($new_instance, $old_instance) in /home/hydra17/ftp/makabiwarszawa.pl/wp-content/plugins/wp-random-posts/randomposts.php on line 38
Regulowana ekspresja claudiny-4 zmniejsza przewodnictwo parakomórkowe poprzez selektywny spadek przepuszczalnoÅ›ci sodu czesc 4 – Klinika makabi warszawa

Klinika makabi warszawa

Regulowana ekspresja claudiny-4 zmniejsza przewodnictwo parakomórkowe poprzez selektywny spadek przepuszczalności sodu czesc 4

14 września 2019 by admin

Wyniki Indukowana ekspresja claudiny-4 nie zmienia poziomów innych białek o zaciśniętych złączach. Claudin-4 jest normalnie wykrywalny w komórkach MDCK (23). W związku z tym najlepiej byłoby wprowadzić oznaczoną epitopowo wersję claudin-4, aby można było odróżnić jej ekspresję i lokalizację komórkową od białka endogennego. Jednak zdecydowaliśmy się nie używać oznaczonych konstrukcji z określonych powodów. Najpierw zaobserwowaliśmy (dane niepokazane), że znakowane białka nie ulegały ekspresji lub pozostawały w przedziale wewnątrzkomórkowym, gdy sekwencja znacznika VSV-G została umieszczona w dowolnej z trzech różnych pozycji w sekwencji. Po drugie, wcześniej opublikowane wyniki wykazały funkcjonalne różnice między karboksyterminalnie znakowanym i nieoznaczonym claudin-1, gdy ulegają ekspresji w komórkach MDCK (13). W związku z tym użyliśmy pozbawionej łańcuchów ludzkiej ludzkiej claudyny-4 typu dzikiego w indukowalnym systemie ekspresji, a wszystkie porównania opierają się na różnicy w obrębie poszczególnych klonów między ich stanami nieindukowanymi a indukowanymi. To również wyeliminowało potencjalny i istotny problem zmienności klonalnej. Komórki MDCK Tet-off transfekowano pTRE- (Claudin-4), a selekcję transfekowanych klonów przeprowadzono przez analizę immunoblot kolonii opornych na higromycynę. Analiza 40 odpornych na higromycynę kolonii dostarczyła 15 klonów wykazujących silną indukcję białka o oczekiwanej wielkości, około 22 kDa. Do dalszych badań wybrano pięć klonów, ponieważ miały niski poziom podstawowy claudin-4 na immunoblotach i były wysoce indukowalne. Figura pokazuje indukcję claudyny-4 po 4 dniach w trzech reprezentatywnych klonach. W każdym z nich występują zmienne poziomy podstawowej ekspresji. Silną indukcję między czterokrotnym a dziesięciokrotnym wzrostem obserwowano we wszystkich klonach po 4 dniach. Nie obserwowano zmiany poziomów claudyny-1/3 i claudiny-2 w połączeniu z indukcją wyższych poziomów claudin-4 (ryc. 1, b i c). Ponadto, indukcja klaudiny-4 nie ma oczywistego wpływu na poziomy innego białka przezbłonowego, okludiny (Figura 1d) lub białka cytoplazmatycznego, które wiąże się z claudinami, ZO-1 (Figura 1e). Wyniki te są podobne do braku wpływu na ZO-1 i okludyny związanej z nadekspresją claudiny-1 w komórkach MDCK (13). Wnioskujemy, że wszelkie zmiany fizjologiczne związane z nadekspresją claudiny-4 mogą być pierwotne, a nie wtórne do zmian poziomu innych białek połączeń. Figura Analiza immunoblot indukcji w trzech osobnych klonach klonów MDCK ufundowanych przez claudin-4 (3, 15, 39 i 43. Komórki hodowano na filtrach przez 4 dni w obecności (+) lub nieobecności (a) 50 ng / ml doksycykliny. Wiele alikwotów z tych samych próbek rozdzielono przez SDS-PAGE, a następnie przeprowadzono analizę immunologiczną dla (a) claudin-4, (b) claudin-1/3, (c) claudin-2, (d) occludin i (e) ZO -1. Blot claudin-4 celowo prześwietlany w celu ujawnienia ekspresji białka w nieindukowanych komórkach tet-off; dolny prążek wynika z proteolizy podczas przygotowywania próbki. Nadekspresja Claudin-4 nie ma widocznego wpływu na inne zmierzone białka o zaciśniętych szczelinach. Obecność lub brak doksycykliny nie ma wpływu na ekspresję claudyny-4 w nietransfekowanych komórkach MDCK. Immunolokalizacja claudin-4 i mikroskopia elektronowa z zamrażaniem pęknięć. Następnie wykorzystaliśmy pośrednią immunofluorescencję do określenia lokalizacji komórkowej nadekspresjonowanej Claudin-4 (ryc. 2). Znaczący wzrost barwienia na granicach komórek był powtarzalny we wszystkich klonach (ryc. 2, b i d). Ta lokalizacja była również obserwowana w nieindukowanych komórkach i została opisana poprzednio przez Sonoda i in. w nietransfekowanych komórkach MDCK (23). W przeciwieństwie do tego, oba białka sprzężone złączy ZO-1 (Figura 2, a i c) i okludyna (nie pokazane) były zatężane na stykach ze złączami wierzchołkowymi. Nie można jednak wykluczyć istnienia drobnych bocznych pul ZO-1 i okludyny za pomocą tych technik, a w rzeczywistości McCarthy et al. (13) wykazali rzadkie włączenie okludyny w boczne fibryle claudin-1. Figura 2 Kolonizacja immunofluorescencji ZO-1 i claudiny-4 w komórkach MDCK transfekowanych tet-off claudin-4 (3. Komórki umieszczono na filtrach i hodowano przez 4 dni w obecności (aib) lub nieobecności (cid) 50 ng / ml doksycykliny i barwiono na ZO-1 (a i c) i claudin-4 (bid). ). ZO-1 jest wąsko skupiony na wierzchołkowym połączeniu, podczas gdy claudin-4 zarówno w nieindukowanych (b), jak i indukowanych (d) komórkach MDCK jest skoncentrowany na granicach komórek-komórek. Wykonaliśmy mikroskopię elektronową typu freeze-fracture , aby określić, czy nadekspresja spowodowała zmiany w nitkach złącza. Oddzielono dwie oddzielne linie klonalne zarówno dla nieindukowanych (21 replik całkowitych) i indukowanych komórek (20 replik całkowitych), jak i wykazując wysoce stałą różnicę
[więcej w: rezonans magnetyczny otwarty warszawa, proces pielęgnowania pacjenta z nadciśnieniem tętniczym, witaminy dla nastolatków ]
[więcej w: luxmed lublin odbiór wyników, leclerc szczecin godziny otwarcia, rezonans magnetyczny przeciwwskazania ]

Posted in: Bez kategorii Tagged: leclerc szczecin godziny otwarcia, luxmed lublin odbiór wyników, rezonans magnetyczny przeciwwskazania

Partnerzy serwisu:



Zobacz tez:

Dysfunkcja immunologiczna wywołana przez Sepsis: czy terapia immunologiczna może zmniejszyć śmiertelność ad 8

Biorąc pod uwagę integralną rolę IL-15 w rozwoju i aktywacji komórek efektorowych i pamięci T, NK i NKT oraz neutrofili, stało się obiecującym kandydatem do terapii immunologicznej (124). W mysich modelach sepsy, leczenie IL-15 zmniejszyło dysfunkcję immunologiczną i poprawiło przeżycie (125). Synergistyczna rola, jaką odgrywa IL-3 w HSC i rozwoju progenitora wraz z IL-7, czyni ... [Read more...]

Komórki rezydualne prezentujące antygen płuc mają zdolność do promowania różnicowania komórek T2 in situ czesc 4

RNA wyekstrahowany z aktywowanych komórek dendrytycznych zastosowano jako kontrolę pozytywną do wykrywania mRNA cytokin. Te komórki dendrytyczne wytworzono z komórek szpiku kostnego hodowanych przez 10 dni w obecności 200 U / ml rGM-CSF, a następnie przez nocną stymulację .g / ml LPS. Wyniki Donosowe podanie immunoglobuliny typu Th1 preferencyjnie indukuje pobudzenie komórek T2 Th2. Patogeny ... [Read more...]

Mechanizm i profilaktyka ostrego uszkodzenia nerek u nefropatii w modelu gryzonia ad

Nienaruszona VL z FLC IIIa, ITPBLL86, wykazała najwyższe powinowactwo wiązania między testowanymi FLC. Seria mutacji skróconych przeprowadzonych na FLC ponownie potwierdziła, że CDR3 obu. i . FLC specyficznie oddziałują z konstruktami THP. Reaktywność z THP korelowała słabo (R2 = 0,23; P = 0,02) z liczbą reszt aminokwasowych w CDR3.

DevURL

Polecane:

Zobacz jak wyglÄ…da budowa domÃÅ‚w w naszej firmie! PeÅ‚en profesjonalizm, monitoring budowy, peÅ‚na kontrola!
psychoterapia-wolski.pl

Tags

bakteryjne zapalenie pochwy leki choroba dwubiegunowa przyczyny dieta paleo jadłospis na tydzień etnoliga football trening ile kcal ma bułka grahamka karpacz informacja turystyczna leclerc szczecin godziny otwarcia luxmed lublin odbiór wyników makabi makabi warszawa najlepszy prezent dla kobiety nietrzymanie moczu zabieg proces pielęgnowania pacjenta z nadciśnieniem tętniczym program promocji zdrowia rezonans magnetyczny otwarty warszawa rezonans magnetyczny przeciwwskazania stargard szczeciński szpital szczepienie dur brzuszny szpital lublin jaczewskiego tomografia komputerowa cennik witaminy dla nastolatków

Copyright © 2021 Klinika makabi warszawa.