Warning: Declaration of WPRandomPostsWidget::update($new_instance) should be compatible with WP_Widget::update($new_instance, $old_instance) in /home/hydra17/ftp/makabiwarszawa.pl/wp-content/plugins/wp-random-posts/randomposts.php on line 38
Zmieniona ekspresja czynnika stabilnoÅ›ci mRNA HuR promuje ekspresjÄ™ cyklooksygenazy-2 w komórkach raka okrężnicy czesc 4 – Klinika makabi warszawa

Klinika makabi warszawa

Zmieniona ekspresja czynnika stabilności mRNA HuR promuje ekspresję cyklooksygenazy-2 w komórkach raka okrężnicy czesc 4

6 września 2019 by admin

Jak pokazano wcześniej w innych liniach komórkowych raka okrężnicy, konstytucyjna ekspresja mRNA COX-2 była obserwowana w obu typach komórek. Jednak poziom mRNA COX-2 w komórkach HT29 był mniejszy niż 20% mRNA znalezionego w komórkach LoVo. Jako kontrolę zbadano poziom m-RNA protoonkogenu c-myc i stwierdzono, że jest on zasadniczo taki sam w dwóch typach komórek. Konstrukt reporterowy zawierający fragment 1,8 kb ludzkiego promotora COX-2 zastosowano do wykazania, że wysoki poziom mRNA COX-2 obserwowany w komórkach LoVo wynika ze zwiększonej transkrypcji (Figura 2b). Nie zaobserwowano różnic w ekspresji kontrolnych konstruktów reporterowych bez promotora lub zawierających promotor SV40 (dane nie pokazane). Odkrycia te sugerują, że w komórkach HT29 występuje zmieniona transkrypcja potranskrypcyjna, co sprzyja zwiększonej syntezie enzymu COX-2 z niskich poziomów mRNA. Figura 2 Transkryptowana kontrola mRNA COX-2. (a) Stałe poziomy mRNA COX-2 i c-myc w komórkach HT29 i LoVo wykrywano za pomocą testów ochrony RNazą. Chroniony mRNA dla c-myc wykryto jako dublet. MRNA GAPDH przedstawiono jako kontrolę dla obciążenia RNA. Przedstawione dane reprezentują trzy eksperymenty. (b) Poziomy konstytutywnej transkrypcji COX-2 w komórkach HT29 i LoVo. Konstrukt reporterowy lucyferazy zawierający promotor COX-2 (wypełnione słupki) lub wektor pGL3 (puste słupki) kotransfekowano wektorem kontrolnym pSV-P-galaktozydazy. Aktywność promotora oceniano jako aktywność lucyferazy znormalizowaną względem aktywności p-galaktozydazy i jest średnią z trzech eksperymentów. (c) Eksperymenty półtrwania mRNA zapoczątkowano przez dodanie 5 ug / ml ActD do HT29 i komórek LoVo we wskazanych czasach i zanotowano mRNA dla COX-2 przez analizę Northern biot dla COX-2 i kontroli wewnętrznej GAPDH. Czasy ekspozycji na blot skorygowano, aby uzyskać podobne początkowe natężenia mRNA COX-2. Zanik mRNA c-myc analizowano podobnie za pomocą testu ochrony przed RNazą z użyciem rybosonek dla c-myc i kontroli wewnętrznej GAPDH. Przedstawione dane reprezentują zduplikowane eksperymenty. Prawidłowy wzrost komórkowy jest związany z szybkim rozpadem mRNA COX-2, podczas gdy stabilizacja mRNA COX-2 jest obserwowana w warunkach sprzyjających wzrostowi nowotworu (19, 20). Aby określić, czy komórki HT29 są uszkodzone w tym aspekcie potranskrypcyjnej kontroli, badano rozkład endogennego mRNA COX-2. Okres półtrwania mRNA COX-2 oceniano metodą Northern blot po dodaniu aktynomycyny D (ActD) do komórek w celu zatrzymania transkrypcji. Wyniki przedstawione na Figurze 2c pokazują, że szybki zanik mRNA COX-2 obserwuje się w komórkach LoVo (t1 / 2 = 44 minuty), jak wcześniej obserwowano w przypadku genów reporterowych zawierających pełnej długości COX-3 3 (3TR lub zakonserwowane bogate w AU. region (19). Przeciwnie, mRNA COX-2 stabilizowano około pięciokrotnie w komórkach HT29 (t1 / 2 = 210 minut). Dla porównania okres półtrwania mRNA konstytutywnie eksprymowanego c-myc oznaczono za pomocą testu ochrony przed RNazą. Szybki obrót mRNA c-myc obserwowano zarówno w komórkach LoVo, jak i HT29 (t1 / 2 = odpowiednio 48 i 42 minuty), co sugeruje, że defekt szybkiego rozpadu mRNA obserwowany w komórkach HT29 występuje w przypadku niektórych, ale nie wszystkich mRNA. Aby zweryfikować, że obserwowana stabilizacja mRNA COX-2 nie jest wynikiem mutacji genowych, sklonowaliśmy i zsekwencjonowaliśmy egzony zawierające region kodujący COX-2 i 3. UTR z obu komórek i stwierdziliśmy, że nie było różnic. W oparciu o zdolność nadekspresji COX-2 do stymulowania wytwarzania angiogenicznych czynników wzrostu (9, 18), przebadaliśmy komórki HT29 i LoVo pod kątem ekspresji VEGF i IL-8. Jak pokazano na Figurze 3a, komórki HT29 wykazują odpowiednio około dziesięciokrotne i dwukrotne wyższe poziomy VEGF (P = 0,0001) i IL-8 (P = 0,0143), niż komórki LoVo. W celu określenia, czy zmiany w szybkim rozpadzie mRNA uwzględnione w zwiększonych poziomach VEGF i IL-8 obserwowanych w komórkach HT29, okresy półtrwania mRNA VEGF i IL-8 badano za pomocą analizy RT-PCR (Figura 3b). Podobnie do wyników pokazanych na Figurze 2c z COX-2, zanotowano szybki zanik mRNA VEGF i IL-8 w komórkach LoVo (t1 / 2 = odpowiednio 51 i 70 minut), podczas gdy stabilizacja obu została wykryta w komórkach HT29 (t1 / 2> 360 minut). Figura 3 Kontrola transkrypcji ekspresji VEGF i IL-8. (a) Ekspresję czynników angiogennych VEGF (lewy panel) i IL-8 (prawy panel) w pożywce hodowlanej HT29 (otwarte słupki) i komórki LoVo (wypełnione słupki) mierzono za pomocą ELISA i są one średnią z trzech eksperymentów. (b) Krzywe prążków mRNA VEGF (trójkąty, kreskowane kreski) i IL-8 (okrężne, ciągłe) mRNA z HT29 (symbole otwarte) i komórki LoVo (wypełnione symbole) uzyskano za pomocą analizy RT-PCR i znormalizowano do kontroli wewnętrznej. GAPDH
[przypisy: rezonans magnetyczny otwarty warszawa, choroba dwubiegunowa przyczyny, bakteryjne zapalenie pochwy leki ]
[podobne: dieta paleo jadłospis na tydzień, szczepienie dur brzuszny, witaminy dla nastolatków ]

Posted in: Bez kategorii Tagged: dieta paleo jadłospis na tydzień, szczepienie dur brzuszny, witaminy dla nastolatków

Partnerzy serwisu:



Zobacz tez:

CX3CR1 reguluje homeostazę makrofagów jelitowych, translokację bakteryjną i odpowiedzi kolektywne Th17 u myszy czesc 4

Wykazano, że makrofagi LP są ważnymi regulatorami odpowiedzi immunologicznej podczas zapalenia jelita. Dlatego specyficzna redukcja makrofagów LP w niedoborze CX3CR1 skłoniła nas do przeanalizowania, w jaki sposób myszy reagują na ostre zapalenie okrężnicy wywołane przez DSS. Rozpoczynając już 2 dni po podaniu DSS, Cx3cr1gfp / gfp i Cx3cr1. /. myszy wykazywały znacząco nasilone objawy choroby ... [Read more...]

Komórki rezydualne prezentujące antygen płuc mają zdolność do promowania różnicowania komórek T2 in situ ad 7

Podobnie jak w przypadku naszych wyników z L. major, brak drenujących węzłów chłonnych podczas wstępnego podawania do białka OVA praktycznie nie miał wpływu na indukcję eozynofilii BAL lub selektywne wytwarzanie cytokin IL-5 i IL-13 przez OVA-restymulowane płuca komórki. Podsumowując, odkrycia te sugerują, że początkowe interakcje APC / antygen, które występują w tkankach, mogą przyczyniać się ... [Read more...]

Niezależne od ciśnienia wzmocnienie przerostu serca u myszy z niedoborem receptora natriuretycznego A ad 7

W przeciwieństwie do tego,% FS u myszy Npr1 + / + pozostawało niezmieniony według TAC (n = 19). Ponownie, różnica między tymi dwoma genotypami była wysoce znacząca (P <0,004 przy powtarzanych pomiarach, ANOVA i test post hoc Scheffa). Operacje pozorowane nie miały wpływu na LVEDD, LVESD lub% FS w Npr1 + / + lub Npr1. ... [Read more...]

DevURL

Polecane:

stolik kosmetyczny do manicure
korony porcelanowe warszawa whiteclinic.pl/korony-porcelanowe-na-metalu-nieszlachetnym/
Oferujemy praktyczne kursy stomatologiczne dla stomatologÃÅ‚w z endodoncji i protetyki.

Tags

bakteryjne zapalenie pochwy leki choroba dwubiegunowa przyczyny dieta paleo jadłospis na tydzień etnoliga football trening ile kcal ma bułka grahamka karpacz informacja turystyczna leclerc szczecin godziny otwarcia luxmed lublin odbiór wyników makabi makabi warszawa najlepszy prezent dla kobiety nietrzymanie moczu zabieg proces pielęgnowania pacjenta z nadciśnieniem tętniczym program promocji zdrowia rezonans magnetyczny otwarty warszawa rezonans magnetyczny przeciwwskazania stargard szczeciński szpital szczepienie dur brzuszny szpital lublin jaczewskiego tomografia komputerowa cennik witaminy dla nastolatków

Copyright © 2021 Klinika makabi warszawa.